Évaluation des réponses d’anticorps spécifiques de Mycobacterium tuberculosis dans des populations ayant différents niveaux d’exposition en provenance de Tanzanie, d’Éthiopie, du Brésil et du Danemark

Contexte Des outils de diagnostic nouveaux, simples et performants sont nécessaires pour le diagnostic de la tuberculose TB Beaucoup d’efforts ont été investis dans la mise au point d’un test de dépistage de la tuberculose à base d’anticorps, mais à ce jour aucun test n’a été réalisé avec suffisamment de sensibilité et de spécificité. Nous avons comparé les réponses ESAT et CFP-anticorps spécifiques de Mycobacterium tuberculosis à un total d’échantillons de sérum humain prélevés chez des donneurs non infectés par M tuberculosis. donneurs avec infection latente, ainsi que des échantillons de patients atteints de tuberculose active Notre étude comprenait des échantillons provenant de pays, représentant des environnements à faible incidence, intermédiaire et élevée. Résultats Nous avons démontré des augmentations significatives des taux d’anticorps chez les contacts infectés par la tuberculose. chez les patients atteints de tuberculose active, comparativement aux patients atteints de tuberculose active contacts fectés En outre, nous avons trouvé une augmentation frappante de l’amplitude des réponses d’anticorps dans des échantillons obtenus à partir d’individus éthiopiens infectés avec et sans maladie, comparés à des individus infectés danois et brésiliens; Conclusion Notre étude confirme la présence d’anticorps ESAT et CFP chez les patients atteints de TB, et nous démontrons que les réponses significatives des anticorps ne se limitent pas à la TB active mais peuvent refléter une infection latente, en particulier dans les zones avec niveaux élevés d’exposition à M tuberculosis Cette constatation est importante pour la compréhension du faible pouvoir discriminant des tests sérodiagnostiques actuels dans les régions d’endémicité, et elle pourrait avoir des implications majeures sur le développement futur des tests sérologiques.

Selon l’Organisation mondiale de la santé, le monde a été témoin de & gt; millions de nouveaux cas de tuberculose tuberculeuse, et environ un tiers de la population mondiale serait infectée par Mycobacterium tuberculosis Dans les pays où la tuberculose est lourde, le diagnostic de tuberculose repose principalement sur l’examen clinique et les résultats radiographiques. et est confirmée par l’examen microscopique des frottis d’expectoration et / ou la culture bactérienne. Malheureusement, la sensibilité de l’examen microscopique des frottis d’expectoration, en particulier, est faible; Récemment, de nouveaux outils de diagnostic ont vu le jour, y compris des tests in vitro de libération de l’IFN-γ. TLIG Parallèlement, de nombreux efforts ont été investis dans le développement d’un test sérologique pour la TB, et parce que la réponse humorale a pris de l’ampleur à mesure que la TB progresse , un test de sérodiagnostic a été proposé comme test de TB active. L’objectif est un outil robuste, bon marché, rapide et à faible technologie pouvant être utilisé fréquemment rencontrés dans les pays avec des infrastructures médiocres et des ressources limitées. Heureusement, de nombreuses études en laboratoire ont rapporté des résultats prometteurs avec un large éventail d’antigènes [,,, -] Cependant, à ce jour, aucun test sérologique disponible sur le marché n’a pu être réalisé. avec une sensibilité et une spécificité suffisantes lorsqu’elles sont évaluées de manière prospective dans un cadre clinique [,,,,,,,,, -] Pour l’interprétation de cette constatation, il est important que la plupart des antigènes utilisent Les tests de sérodiagnostic de première génération sont largement partagés au sein du genre Mycobacterium Une question clé demeure donc: dans quelle mesure la performance décevante des tests actuels est-elle le résultat d’une réactivité croisée avec le bacille Calmette-Guérin BCG et les mycobactéries non tuberculeuses NTM de l’environnement ou de la forte prévalence de la TB latente dans ces régions. Nous avons abordé cette question en nous concentrant sur les antigènes ESAT et CFP qui sont codés dans la région RD du génome de M tuberculosis et qui sont donc absents dans tous les BCG. souches vaccinales et dans la majorité des NTM Les deux antigènes sont actuellement utilisés dans les IGRA disponibles dans le commerce pour la détection de l’infection tuberculeuse [,,] et ont également été évalués comme protéine fusion ESAT-CFP – une approche qui présente plusieurs avantages, principalement en ce qui concerne son prix peu élevé et sa production facile à grande échelle Plusieurs rapports récents indiquent que ces antigènes sont fréquemment reconnus par les anticorps chez les patients. avec la tuberculose, à la fois dans les régions où la tuberculose n’est pas endémique [,, -] et dans les régions où la tuberculose est endémique Les ESAT et CFP- sont manifestes lors d’infections latentes , mais on ne sait pas si Chez les patients atteints de tuberculose latente et chez les individus ayant une infection tuberculeuse latente M, les anticorps circulants dirigés contre les antigènes spécifiques de la tuberculose sont présents chez les patients infectés porteurs de tuberculose latente ou subclinique. Nous avons construit une protéine de fusion ESAT-CFP et des anticorps mesurés. réponses à ce réactif dans un total d’échantillons de sérum humain provenant de personnes dans les pays, ce qui représente une augmentation des incidences de tuberculose M Notre étude confirme la présence d’anticorps ESAT et CFP chez les patients tuberculeux et démontre que les réponses significatives d’anticorps ne sont pas limitées aux Tuberculose, mais peut en particulier refléter une infection latente, dans les zones où le taux d’exposition à la tuberculose est élevé. ortant pour la compréhension du faible pouvoir discriminant des tests sérodiagnostiques actuels dans les régions d’endémicité et pouvant avoir des implications majeures pour le développement futur des tests sérologiques

Méthodes

Populations d’étude et définitions

Un total d’échantillons ont été collectés dans différents pays et sont décrits en détail ci-dessous et dans le tableau, les individus infectés par le VIH ont été exclus de l’étude.

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des donneurs de l’échantillonTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des donneurs d’échantillonsExemples du Danemark Deux cent vingt-sept échantillons ont été obtenus auprès de donneurs résidant à Copenhague, Danemark Le consentement éclairé écrit a été obtenu des personnes, et l’étude a été approuvée par le Comité local d’éthique pour les approbations de Copenhague et Frederiksberg KF – / et KF – Ces échantillons comprenaient des échantillons prélevés sur des patients atteints de TB confirmée résidant au Danemark et recrutés dans des hôpitaux danois DK-TB; les moyens de diagnostic de la tuberculose comprenaient l’examen microscopique des frottis d’expectoration, la culture, la radiographie thoracique et, dans certains cas, la PCR; échantillons provenant de résidents danois asymptomatiques avec des résultats positifs du test Quantiferon TB Gold QFN qui a eu un contact étroit avec un cas index TB lors d’une épidémie de TB à Thisted, Danemark DK-CON ; des échantillons provenant de donneurs résidents danois DK-CC, QFN négatif, non symptomatique, volontaire; et des échantillons de volontaires Danois vaccinés, sains et danois, sans risque connu d’exposition à la tuberculose M DK-BCGSéchantillons du Brésil Quatre-vingt-dix échantillons ont été obtenus auprès de résidents de Sao Paulo, Brésil Tous les donateurs brésiliens ont signé une déclaration de consentement éclairé et accepté de subir un test de dépistage du VIH. La répartition des échantillons était la suivante: des échantillons de patients atteints de tuberculose confirmée, obtenus auprès d’un centre de référence pour la tuberculose à Sao Paulo; tous les donneurs ont été définis comme des patients atteints de tuberculose qui ont eu au moins un résultat positif d’un frottis d’expectoration et / ou d’une culture de tuberculose-B-tuberculose; échantillons provenant de contacts familiaux non symptomatiques avec un test cutané tuberculinique positif TST résultats induration, ⩾ mm; tous les contacts vivaient dans la même maison que les patients atteints de tuberculose qui étaient déjà inclus dans le groupe précédent, et tous ont subi un TCT et une radiographie thoracique et ont été interrogés pour les symptômes de la tuberculose BZ-CON; et induration TST négative, & lt; On a obtenu 64 échantillons provenant de donneurs résidant en Éthiopie rurale. Tous les donneurs avaient fourni un consentement écrit, et l’étude a été réalisée sous un Protocole d’étude approuvé par les comités d’éthique et d’éthique nationaux et institutionnels La répartition des échantillons était la suivante: échantillons de patients tuberculeux positifs à l’expectoration recrutés dans les villes rurales de Hossana et Butajira, Ethiopie ET-TB; ESAT – contacts familiaux asymptomatiques positifs des cas index positifs à l’expectoration; tous avaient des résultats radiographiques normaux et des résultats négatifs au test d’expectoration et à la culture, et tous ont été testés positifs à l’ESAT en utilisant une IGRA interne, comme décrit ailleurs ET-CON ; des échantillons de sujets témoins communautaires choisis au hasard dans les mêmes zones que les patients atteints de tuberculose; un contact TB récent a été exclu sur la base des réponses à un questionnaire, et tous les sujets avaient des résultats radiographiques normaux, ne présentaient aucun symptôme et avaient des résultats négatifs pour tous les tests et cultures d’expectorations ou ne pouvaient pas produire d’expectorations ET-CC. ESAT- échantillons positifs provenant de Tanzanie Cent quatre vingt quatre échantillons ont été prélevés sur des donneurs positifs à la culture M tuberculosis résidant à Mwanza, Tanzanie TZ-TB Les échantillons ont été prélevés chez des sujets participant à un essai contrôlé randomisé portant sur le rôle des micronutriments et des co-infections dans la tuberculose pulmonaire qui a été menée à Mwanza, en Tanzanie L’étude a été approuvée par le Comité d’éthique de l’Institut national de recherche médicale en Tanzanie, et un consentement oral éclairé a été obtenu de tous les participants à l’étude.

Expression de protéine recombinante et purification

Le plasmide codant pour la protéine ESAT-CFP a été généré par liaison de la région codante du polypeptide CFP à la région codante du polypeptide ESAT. L’ESAT-CFP codant pour l’hybride a été lié à une région codant pour une étiquette histidine N-terminale et a été inséré dans le vecteur d’expression pQE Qiagen en utilisant les sites NcoI et BamHI du vecteur La construction plasmidique finale a été transformée en souche NF d’Escherichia coli pour la production de la protéine de fusion ESAT-CFP, et l’expression a été induite avec mmol / L isopropyl β-D- thiogalactopyranoside La protéine de fusion ESAT-CFP a ensuite été purifiée par chromatographie sur chélate métallique, comme décrit par ailleurs Les protéines recombinantes ESAT- et CFP- ont été exprimées et purifiées, comme décrit par ailleurs

Mesure des anticorps IgG sériques par ELISA

Des plaques de microtitrage en polystyrène à quatre-vingt-seize puits Nunc ont été revêtues pendant une nuit à ° C avec un ul de solution d’antigène dans du tampon tampon M pH, aux concentrations suivantes: ESAT-, pg / ml; CFP-, μg / mL; Protéine de fusion ESAT-CFP, μg / mL; ou ovalbumine, pg / ml Les plaques ont ensuite été lavées avec du PBS pH, plus du% Tween PBS-T et ont été bloquées pendant une nuit à ° C avec du tampon carbonate plus du sérum albumine bovine pH, Les échantillons de sérum ont été dilués à: dans PBS plus BSA et% Tween, ont été ajoutés aux puits, et incubés h à température ambiante. Après un autre lavage avec du PBS-T, les plaques ont été incubées à température ambiante avec des anticorps monoclonaux anti-IgG de souris conjugués à la Peroxydase de raifort BD Pharmingen ; N ° de catalogue: dilution L’activité enzymatique a été déterminée par incubation à température ambiante avec μL de TMB plus substrat par puits. Pour arrêter la réaction, on a ajouté μL d’acide sulfurique M et on a mesuré la densité optique OD à nm et à nm. pour la soustraction de l’arrière-plan

L’analyse des données

La valeur seuil du test ELISA a été calculée sur la base d’échantillons de volontaires danois sains vaccinés par le BCG sans facteur de risque connu de TB. Sujets témoins négatifs utilisant la valeur moyenne plus SD des valeurs de DO Des analyses statistiques ont été réalisées et les graphiques ont été conçus Logiciel statistique SAS, version SAS Institute, et logiciel GraphPad Prism, version Les valeurs DO médianes ont été comparées entre des groupes d’échantillons en utilisant le test de somme de rang Mann-Whitney non paramétrique avec la correction post-test de Bonferroni

Résultats

Caractérisation de la protéine de fusion ESAT-CFP Nous avons conçu une protéine de fusion ESAT et CFP qui a été produite et exprimée dans E. coli. Le poids moléculaire apparent de la protéine de fusion était kDa et des anticorps monoclonaux spécifiques de l’ESAT et de la CFP. – Composant lié à la protéine de fusion dans des expériences de transfert de Western Figure 101 Quatre échantillons de sérum ont été testés pour des réponses d’anticorps spécifiques aux ESAT – CFP -, ESAT – seuls et CFP – seuls. ESAT ou CFP seul et pour la protéine de fusion ESAT-CFP, et nous avons trouvé une forte corrélation Spearman’s r =; P & lt; , démontrant que la protéine de fusion et les composants uniques ont une activité similaire

Figure vue grandDownload slideA, analyse de l’électrophorèse sur gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide de Commassie-coloré des protéines purifiées Lane, marqueur de poids moléculaire; voie, ESAT-; voie, CFP-; piste, protéine de fusion ESAT-CFP B, analyse par transfert de Western ESATlane et piste de protéine de fusion ESAT-CFP ont été incubées avec l’anticorps monoclonal anti-ESAT – voie HYB-CFP et la voie de protéine de fusion ESAT-CFP ont été incubées avec anti-CFP- anticorps polyclonal KFigure View largeTélécharger la lameA, analyse par électrophorèse sur gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide coloré au Commassie des protéines purifiées Voie, marqueur de poids moléculaire; voie, ESAT-; voie, CFP-; piste, protéine de fusion ESAT-CFP B, analyse par transfert de Western ESATlane et piste de protéine de fusion ESAT-CFP ont été incubées avec l’anticorps monoclonal anti-ESAT – voie HYB-CFP et la voie de protéine de fusion ESAT-CFP ont été incubées avec anti-CFP- anticorps polyclonal K

Figure Vue grandDownload slideGraphique montrant la corrélation entre la plus haute densité optique OD pour ESAT ou CFP-single protéines contre la valeur OD pour la protéine de fusion ESAT-CFP Un test non paramétrique de corrélation Spearman a été effectuée Spearman’s r =; P & lt; Figure Vue grandDownload slideGraphique montrant la corrélation entre la plus haute densité optique OD pour ESAT ou CFP-single protéines contre la valeur OD pour la protéine de fusion ESAT-CFP Un test non paramétrique de corrélation Spearman a été effectuée Spearman’s r =; P & lt; Des anticorps spécifiques ESAT – CFP sont associés à une infection tuberculeuse Nous avons testé des échantillons provenant de patients tuberculeux d’une région où la tuberculose est endémique en Tanzanie et de sujets témoins communautaires vaccinés par le BCG qui n’avaient pas été exposés à M tuberculosis d’une région où La tuberculose n’est pas endémique Danemark Sur la base de ces données, nous avons calculé une valeur seuil pour les analyses ultérieures. Comme le montre la figure,% des patients tuberculeux tanzaniens avaient des réponses d’anticorps positives à la protéine de fusion ESAT-CFP. les sujets témoins négatifs

Figure Vue largeDownload-plot montrant les valeurs de densité optique DO obtenues chez des patients atteints de tuberculose active résidant dans le nord de la Tanzanie TZ-TB et chez des donneurs volontaires Danois Calmette-Guérin sains et vaccinés, sans facteur de risque connu de tuberculose DK- BCG La ligne pointillée indique la valeur de coupure, calculée comme DOs SD moyennes pour les volontaires sains danois résidentsFigure View largeTélécharge Diagramme montrant les valeurs de densité optique OD obtenues chez des patients atteints de tuberculose active résidant dans le nord de la Tanzanie TZ-TB et en bonne santé, Bacille Calmette-Guérin-vaccinés, donneurs volontaires danois sans facteur de risque connu de tuberculose DK-BCG La ligne pointillée indique la valeur seuil, calculée comme la SDD moyenne pour les volontaires danois sains titre. La présence d’anticorps spécifiques ESAT-CFP augmente avec infection et avec une forte exposition à la tuberculose Les taux d’anticorps ont été comparés g groupes d’échantillons prélevés au Danemark, au Brésil et en Éthiopie, représentant des environnements de tuberculose basse, intermédiaire et élevée, respectivement. En outre, les échantillons de chaque pays ont été divisés en contrôles communautaires CC, M contacts infectés par la tuberculose sans maladie CON et les patients atteints de tuberculose confirmée; Le statut d’infection à M tuberculosis chez les sujets a été déterminé par la mesure de la réponse immunitaire CMI cellulaire à tous les sites, par des tests de libération d’IFN-γ pour les sujets danois et éthiopiens et par TST pour les sujets brésiliens. et les groupes BZ-CC ont eu des résultats CMI négatifs; en revanche, seuls les sujets ET-CC ont eu une réponse CMI négative à ESAT – Bien que cela rend le groupe ET-CC moins comparable aux équivalents danois et brésiliens, cela reflète le niveau élevé d’infection parmi la population générale en Ethiopie. La figure A montre les valeurs de DO d’anticorps obtenues de personnes du groupe DK-CC, du groupe DK-CON et du groupe DK-TB, car le Danemark a un faible score global. Nous avons trouvé une différence très significative entre les valeurs médianes de DO des anticorps pour le groupe DK-CC non infecté par M tuberculosis et le QFN infecté par M tuberculosis. groupe DK-CON positif, et bien qu’une tendance similaire soit présente, aucune différence significative entre le groupe DK-CON et le groupe DK-TB n’a été observée. Les valeurs médianes OD d’anticorps et les valeurs P exactes sont montrées dans ta Parmi les échantillons brésiliens figure B, les différences entre les groupes BZ-CC et BZ-CON étaient significatives, de même que les différences entre les groupes BZ-CON et BZ-TB. Le Brésil a une incidence intermédiaire de TB, mais les échantillons brésiliens Des valeurs de DO similaires à celles de leur tableau d’équivalents danois En revanche, la figure C montre une augmentation remarquable de l’ampleur des réponses en anticorps en Éthiopie, reflétant peut-être l’incidence élevée de TB. Une différence significative a également été observée entre les ET-CC. Les groupes ETAT – positifs ET – ET TB – ET – figure C Un intérêt particulier était que les réponses en anticorps étaient nettement plus élevées dans le groupe ET – CON que dans les groupes DK – CON et BZ – CON, même si tous les sujets étaient également les groupes danois et brésilien avaient une infection latente à M tuberculosis, déterminée sur la base de leurs réponses CMI. La même chose a été observée pour les groupes de patients atteints de tuberculose.

Figure Vue largeDownload-plot montrant les valeurs de densité optique OD pour des échantillons du Danemark, du Brésil et d’Éthiopie A, réponses d’anticorps chez des sujets témoins danois avec un test négatif Quantiferon TB Gold QFN résultats DK-CC, contacts tuberculose dj-positifs danois DK -CON, et Danois atteints de TB DK-TB B, réponses anticorps des sujets témoins de la communauté brésilienne avec résultats négatifs au TCT tuberculinique BZ-CC, contacts tuberculose-TST positifs au Brésil BZ-CON, et patients brésiliens TB BZ-TB C , Réponses des anticorps des sujets témoins de la communauté éthiopienne ET-CC, des contacts éthiopiens positifs à la tuberculose ET-CON et des patients éthiopiens atteints de TB TB-TB lignes horizontales, valeur médiane de DO; ligne pointillée, valeur de coupure * P & lt; ** P & lt; *** P & lt; NS, not significantFigure View largeTéléchargement Diagramme montrant les valeurs de densité optique DO pour des spécimens du Danemark, du Brésil et d’Éthiopie A, Réponses d’anticorps chez des sujets témoins danois avec des résultats négatifs Quantiferon TB Gold QFN DK-CC, tuberculose danoise QFN-positive La tuberculose contacte DK-CON et les patients danois atteints de TB DK-TB B, les réponses anticorps des sujets contrôles communautaires brésiliens avec des résultats négatifs au TCT tuberculinique BZ-CC, les contacts tuberculose TBT positifs au Brésil BZ-CON et les patients brésiliens TB BZ -TB C, réponses des anticorps des sujets témoins de la communauté éthiopienne ET-CC, ESAT – contacts positifs de la TB éthiopienne ET-CON, et patients éthiopiens atteints de TB TB-TB lignes horizontales, valeur de DO médiane; ligne pointillée, valeur de coupure * P & lt; ** P & lt; *** P & lt; NS, non significatif

Table View largeTélécharger les réponsesAntiquités chez les sujets du Danemark, du Brésil et de l’ÉthiopieTable View largeDownload slideAnti-réponses chez des sujets du Danemark, du Brésil et de l’ÉthiopieDeux personnes du groupe BZ-CC et du groupe ET-CC avaient des taux d’anticorps supérieurs au seuil valeur de cette dernière, testée négative pour l’ESAT – L’exclusion des personnes ESAT – positives du groupe ET-CC n’a pas modifié la valeur médiane de la DO significativement non montrée

Discussion

La réponse la plus simple à ce casse-tête est que les réponses que nous avons observées reflètent l’exposition et l’infection à M tuberculosis, même chez des individus sains provenant de régions où la tuberculose est présente chez les sujets sains. est fortement endémique Sur la base des données montrant que des anticorps circulants spécifiques de la tuberculose M peuvent être trouvés non seulement chez les individus atteints de tuberculose active, mais aussi chez les individus ayant une infection tuberculeuse latente, nous suggérons que la mauvaise performance peut refléter au moins partiellement la prévalence élevée de tuberculose latente dans ces régions Il est important de souligner que tous les individus IGRA-positifs n’ont pas d’anticorps spécifiques M tuberculosis Par exemple, nous avons observé que, dans le groupe de contact danois QFN-positif, seul% avait une réponse positive avec un faible valeur de DO, ce qui suggère qu’une réponse sérologique positive a des cinétiques de développement différentes ou des exigences différentes, par exemple, il peut Greenaway et al ont trouvé que% des sujets témoins de la communauté gambienne avaient des anticorps spécifiques à l’ESAT-, et% avaient des anticorps spécifiques à la CFP- Parmi les contacts du ménage, les chiffres étaient respectivement légèrement plus élevés en% et en%, avec le pourcentage le plus élevé de répondants chez les patients atteints de tuberculose active% et% respectivement. Certains rapports ont été publiés concernant les réponses anticorps à différents stades d’infection [,,] Une étude du Canada par Silva et al a constaté que% des patients atteints de TB inactivée avaient une réponse humorale positive à l’ESAT – Davidow et al ont ensuite répété cette découverte et suggéré que l’immunoprofilage, c.-à-d. l’utilisation de différents antigènes M tuberculosis, pourrait faire la distinction entre états de tuberculose Ces résultats sont en accord avec nos résultats, car ils démontrent la présence d’anticorps spécifiques à M tuberculosis Cependant, Davidow et ses collègues ont trouvé qu’une réponse à l’ESAT était associée à une tuberculose active plutôt qu’à une TB active. Nos résultats n’appuient pas cette observation, car les taux les plus élevés d’ESAT et Dans cette étude, nous avons également observé que les personnes vivant dans une région où la tuberculose est endémique présentent des taux élevés d’anticorps spécifiques à M tuberculosis, comparativement aux individus qui vivent dans des zones non endémiques et endémiques intermédiaires. que l’incidence de la tuberculose dans un pays donné a une influence marquée sur les réponses anticorps contre les antigènes M tuberculosis, très probablement en raison d’une exposition répétée au pathogène Une autre possibilité est que les taux élevés d’anticorps observés dans les échantillons éthiopiens pourraient résulter d’une infection par NTM ou Mycobacterium leprae ou d’une liaison non spécifique d’anticorps non pertinents. Cependant, ESAT et CFP- Cette étude a également montré que ces antigènes sont présents dans très peu de MNT, rendant improbable une réaction croisée avec les antigènes NTM comme un facteur de confusion majeur. De plus, des échantillons représentatifs des cohortes éthiopiennes ont été testés pour des anticorps anti-ovalbumine. nous avons trouvé seulement des élévations mineures et aucune différence dans les niveaux d’anticorps entre les personnes dans le groupe ET-CC, les contacts, et les patients avec des données TB non montrées, indiquant que la différence observée entre les groupes éthiopiens n’est pas due à la liaison non spécifique d’anticorps non pertinents. En ce qui concerne l’infection à M leprae, il est peu probable qu’elle soit un facteur de confusion significatif en raison de la faible incidence, par rapport à l’infection à M tuberculosis, l’incidence de l’infection à M leprae est probablement l’infection leprae ne semble induire que de faibles réponses anti-ESAT, comparé à l’infection à M tuberculosis Nous avons observé que Braz TST négatif Les sujets iliens et les personnes négatives ESAT du groupe ET-CC avaient des taux d’anticorps positifs C’était inattendu, mais ni un IGRA basé sur ESAT ni le TST n’a une sensibilité de% Par conséquent, nous ne pouvons pas déterminer si ces sujets étaient effectivement infectés, Étant donné que les ESAT et les CFP sont systématiquement les antigènes les plus associés à l’infection à M tuberculosis, nos données suggèrent que la très forte prévalence de l’infection tuberculeuse latente dans les pays où la tuberculose est endémique peut réduire la spécificité. D’un autre côté, les données du Brésil impliquent que cela peut ne pas être le cas dans les pays où l’incidence de la tuberculose est intermédiaire – des pays où la tuberculose a encore un impact majeur sur la santé publique. le critère utilisé pour définir le succès d’un test basé sur l’anticorps exclusivement pour la tuberculose devrait être l’identification spécifique de la tuberculose active dans les populations où la prévalence de la tuberculose est très élevée tuberculose latente

Remerciements

Nous remercions les techniciens de laboratoire Patricia Grenés, Anette Hansen, Helena Tomiyama et Tania Silva pour leur aide précieuse. Priscilla Costa, pour avoir aidé à coordonner le dépôt brésilien; le Département du développement des vaccins du Statens Serum Institute de Copenhague, au Danemark, pour le clonage et la purification de la protéine de fusion ESAT-CFP; et l’Institut de microbiologie de l’Université Niels Fiil, à Copenhague, pour avoir permis l’utilisation de la souche E coli de production. NFFinancière Programme spécial de l’OMS pour la recherche et la formation sur les maladies tropicales et l’École supérieure de santé internationale Université de CopenhagueParents d’intérêt potentiels PA nommé coinventor sur les brevets relatifs à la découverte de la protéine ESAT; tous les droits ont été attribués au Statens Serum Institut Tous les autres auteurs: no conflicts